工作原理
蛋白質(zhì)定量是蛋白質(zhì)研究的基礎工作之一。BCA (bicinchoninic acid)是理想的蛋白質(zhì)定量方法，是當前比Lowry法更優(yōu)越的專(zhuān)用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。
BCA Protein Assay Kit?是一種用于蛋白質(zhì)濃度測定的試劑盒，它基于BCA（Bicinchoninic Acid）法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量分析。蛋白質(zhì)在堿性條件下，將 Cu 2+還原為 Cu +，Cu +與 BCA 試劑形成紫顏色的絡(luò )合物，該復合物的顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，從而可以通過(guò)測量其在562nm處的吸光度來(lái)確定蛋白質(zhì)的濃度。該方法快速靈敏、穩定可靠，不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，對不同種類(lèi)蛋白質(zhì)檢測的變異系數非常小。BCA 蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)實(shí)現了蛋白濃度測定簡(jiǎn)單、穩定性高、靈敏度高和兼容性高的特點(diǎn)。
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品優(yōu)勢
準確靈敏，線(xiàn)性范圍廣：BCA 試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是 10-2000μg/mL。
快速：45 分鐘內完成測定，比經(jīng)典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。
經(jīng)濟實(shí)用：在微孔板中進(jìn)行測定，可大大節約樣品和試劑用量。
效果穩定：不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響，檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數遠小于考馬斯亮藍。
使用說(shuō)明
1. 配制工作液: 根據標準品和樣品數量，按體積比A : B (50：1)配制適量BCA工作液，充分混勻。BCA工作液室溫24小時(shí)內穩定。
2. 稀釋標準品：取10微升標準品用PBS稀釋至100ul（標準品一般可用PBS稀釋?zhuān)?，使終濃度為0.5mg/ml。將標準品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20ul加到96孔板的蛋白標準品孔中，加PBS補足到20ul。
3. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中，補加PBS到20ul。
4. 各孔加入200ul BCA工作液，37℃放置30分鐘。
5. 冷卻到室溫，用酶標儀562nm測定OD值，根據標準曲線(xiàn)計算出蛋白濃度。
注意事項
1. 在低溫條件或長(cháng)期保存出現沉淀時(shí)，可攪拌或37℃溫育使溶解, 如發(fā)現細菌污染則應丟棄。
2. 樣品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸銨、脂類(lèi)會(huì )影響檢測結果，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒；高濃度的去垢劑也影響實(shí)驗結果，可用TCA沉淀去除干擾物質(zhì)。
3. 要得到更為精確的蛋白濃度結果，每個(gè)蛋白梯度和樣品均需做復孔, 每次均應做標準曲線(xiàn)。
4. 當試劑A和B混合時(shí)可能會(huì )有渾濁，但混勻后就會(huì )消失，工作液在密閉情況下可保存1周。
5. 需準備37℃水浴或溫箱、酶標儀或普通分光光度計，測定波長(cháng)為540-595nm之間，562nm最佳。酶標儀需與96孔酶標板配套使用。使用分光光度計測定蛋白濃度時(shí)，試劑盒測定的樣品數量會(huì )因此而減少。使用溫箱孵育時(shí)，應注意防止因水粉蒸發(fā)影響檢測結果。
文獻引用精選
