發(fā)表者：北京博奧森生物      發(fā)表時(shí)間：2019-8-12

免疫分型（immunophenotyping）是指根據存在于細胞表面、核或細胞質(zhì)中的標記物或抗原的類(lèi)型，利用基于抗體的對異質(zhì)細胞群進(jìn)行分析，以鑒定多種目標細胞群的存在及比例。通過(guò)使用特異性識別不同細胞類(lèi)型標記物或抗原的抗體，從而幫助鑒定細胞的譜系。例如腫瘤標志物的檢測、浸潤免疫細胞的分析、白血病的診斷等。免疫分型可以利用組織切片(新鮮或固定組織)通過(guò)免疫組化方法以及利用細胞懸液通過(guò)流式細胞術(shù)進(jìn)行分析。

流式細胞術(shù)可以說(shuō)是用于探測人類(lèi)免疫表型的首選技術(shù)，特別是由于它可以在諸如血液的復雜混合物中通過(guò)測量許多單個(gè)細胞上的多個(gè)參數，從而鑒定和分析包括稀有亞群在內的許多細胞亞群。并且由于可用的抗體試劑的擴大和實(shí)驗方案的不斷調整，流式細胞術(shù)不僅可用于評估細胞表面蛋白的表達，還可以用于評估胞內蛋白的表達或修飾水平以及細胞因子的水平。

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使用細胞表面標記的特定組合對免疫細胞亞群進(jìn)行定義是一個(gè)不斷發(fā)展的過(guò)程，特別是那些高頻研究的細胞類(lèi)型。這些類(lèi)型包括調節性T細胞(Treg)、分泌IL-17的T輔助細胞(Th17)、樹(shù)突狀細胞(DC)和自然殺傷細胞(NK)。盡管新標記的發(fā)現和新的細胞子集將在未來(lái)一段時(shí)間內持續下去，然而，我們還是希望細胞免疫學(xué)領(lǐng)域具有足夠的成熟程度，以達到對大多數共同研究的免疫細胞亞群的定義達成共識。換句話(huà)說(shuō)，應當能夠定義一種相對穩定的標記集合，其描繪T細胞、B細胞、NK細胞、單核細胞和DC細胞等主要類(lèi)型。因此，我們通過(guò)總結文獻確定各個(gè)細胞類(lèi)型的關(guān)鍵分化標記，并且總結目前用于人體免疫監測的標準化免疫表型分型組合。

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T細胞

T淋巴細胞可在CD3表達的基礎上被免疫表型化，隨后進(jìn)一步細分(如CD8+殺傷性T細胞和CD4+輔助性T細胞)。此外，T細胞表型是靈活的，可以隨不同的微環(huán)境發(fā)生變化；表型也可能重疊在多個(gè)T細胞群體之間。此外，T細胞亞群的分類(lèi)還可能是根據響應某些刺激或磷酸化免疫信號蛋白（如STAT蛋白）而分泌的特定細胞因子水平來(lái)確定。

殺傷性T細胞(又被稱(chēng)作細胞毒性T淋巴細胞，CD8+)能識別抗原，這些抗原是由感染因子釋放的，并與宿主細胞結合。殺傷性T細胞能夠識別多種細胞類(lèi)型和病原體并與之相互作用。T細胞受體與外源抗原結合，觸發(fā)細胞毒素向受感染細胞釋放，導致細胞死亡。殺傷性T細胞的主要鑒定標志物就是CD8+，但是如果需要根據不同生理狀態(tài)下對殺傷性T細胞進(jìn)行功能鑒定，還可以進(jìn)一步增加其他標志物形成標志物組合。比如，對殺傷性T細胞進(jìn)一步定義幼稚、中央記憶性、效應記憶性和效應T細胞亞群的經(jīng)典標志物是基于趨化因子受體7(CCR7；也稱(chēng)為CD197)和CD45RA（或CD45RO）的表達情況；對殺傷性T細胞進(jìn)一步分析其活化狀態(tài)是基于HLA-DR和CD38的表達情況^1-3。

輔助性T細胞(即Th1、Th2、Th9、Th17和Tfh細胞等)具有很少的細胞毒性活性并且分泌對其它白細胞(例如B細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞或中性粒細胞)起作用以清除病原體的細胞因子。除了CD4這一共有標志物，不同輔助性T細胞還有各自的常用鑒定標志物組合，如下圖所示：

調節性T細胞（即Treg）在維持免疫穩態(tài)中起著(zhù)重要作用，并且也與許多自身免疫性疾病有關(guān)⁴。迄今為止，已確定了兩種主要類(lèi)別的CD4+Treg：組成型表達CD25和FoxP3的天然Tregs(nTreg)以及誘導后激活表達CD25和FoxP3的誘導型Tregs(iTreg)⁵。人和小鼠Treg的CD25表達情況不同。在小鼠中，所有CD25+細胞都被認為是Treg；而在人的免疫系統，只有那些高水平表達CD25的細胞被認為是Treg⁶。

iTreg來(lái)源于胸腺，在某些抗原和專(zhuān)門(mén)的免疫調節細胞因子（如TGF-1、IL-10和IL-2）的刺激下，由單陽(yáng)性CD4細胞分化為表達CD25和Foxp3的Tregs⁶。還報告了iTreg群體具有一定的可塑性，可以轉化為其他T細胞亞型，例如Th1和Th17細胞⁶。

目前，FOXP3是Treg的最明確的標記，盡管有報道發(fā)現少數Treg亞群是FOXP3-⁷。轉錄因子Foxp3作為T(mén)regs的標志又進(jìn)一步推動(dòng)了其他的Treg標記的發(fā)現，包括CD127。若干已發(fā)表的報告證明CD127表達與Foxp3呈負相關(guān)⁸。比如，利用CD4+、CD25+和CD127-組合分選策略，可用于獲得體外可擴增的Treg細胞。

Bioss具有豐富的T細胞分型相關(guān)產(chǎn)品，代表產(chǎn)品如下：

另外，Bioss近期正在進(jìn)行直標一抗的試用和專(zhuān)屬優(yōu)惠活動(dòng)，很多免疫細胞分型標志物相關(guān)多種熒光標記一抗位列其中，可以滿(mǎn)足您的多種需求，并有三重好禮等您來(lái)拿！讓您足不出戶(hù)，立享熒光盛宴！

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參考文獻：

1.Sallusto F, et al. Nature. 1999; 401:708–712.

2.Tussey L, et al. Eur. J. Immunol. 2000; 30:1823–1829.

3.Appay V, et al. Nature Med. 2002; 8:379–385.

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5.Chatenoud L, Bach JF. J Clin Invest. 2006;116: 2325-2327.

6.Schmetterer, Klaus G. et al. The FASEB Journal. 26 (6): 2253–2276.

7.Otsubo K, et al. Clin Immunol. 2011 Oct;141(1):111-20.

8.Liu W, et al. J Exp Med. 2006;203:1701-1711.