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免疫組化問(wèn)題解答

1、染色過(guò)強？

原因
解決方法
抗體濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)
降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜
孵育溫度過(guò)高超過(guò)37度
一般在室溫20-28度
DAB顯色時(shí)間過(guò)長(cháng)或濃度過(guò)高
顯色時(shí)間不超過(guò)5-12分鐘，以顯微鏡下觀(guān)察為準

2、非特異性背景染色？

原因
解決方法
操作過(guò)程中沖洗不充分
每步?jīng)_洗3次每次5分鐘
組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷
可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長(cháng)
組織中含內原性生物素
正常非免疫動(dòng)物血清再封閉
血清蛋白封閉不充分
血清蛋白封閉不充分

3、染色弱？

原因
解決方法
抗體濃度過(guò)低、孵育時(shí)間過(guò)短
提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少于60分鐘
試劑超過(guò)有效使用時(shí)間
應更換試劑
操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干
每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
使試劑稀釋（應防止切片干燥）
室溫太低，低于15度
要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過(guò)夜
蛋白封閉過(guò)度
封閉不要超過(guò)12分鐘

4、染色陰性？

原因
解決方法
操作步驟錯誤
應重試，設陽(yáng)性對照
組織中無(wú)抗原
設陽(yáng)性對照以驗證試驗結果
一抗與二抗種屬連接錯誤
仔細確定一抗二抗種屬無(wú)誤

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通過(guò)國際醫療器械-質(zhì)量管理體系ISO 13485:2016 GB/T 42061-2022 證書(shū)編號: CQC24QY10047R0M/1100

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